Título

Padronização do Sequenciamento de Nova Geração (NGS) - “TruSight HLAv2” na plataforma MiSeq_illumina

Introdução

O avanço das técnicas de sequenciamento tem sido significativamente representativo, mostrando a cada ano inovações e praticidade. Para melhorar alguns pontos relevantes à análise novas técnicas chegaram ao mercado, tal como, o NGS (New-Generation Sequencing). O Antígeno Leucocitário Humano (HLA) está localizado no braço curto do cromossomo 6, as sequencias nucleotídicas “A, T, C, G” presentes em um indivíduo constitui o haplótipo HLA. Observa-se que o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) “TruSight HLAv2” na plataforma MiSeq_illumina possui a capacidade de aumentar a cobertura do gene HLA resolvendo resultados ambíguos.

Material e Método

A padronização NGS foi validada com base em parâmetros específicos relevantes para a plataforma utilizada, seguindo normas de padronização internacionais e nacionais da ASHI (American Society for Histocompatibility and Immunogenetics) e ABH (Associação Brasileira de Histocompatibilidade). Amostras: 240, sendo 10 - ASHI, 10 - ABH, 20 - Laboratório de Imunogenética-UERJ e 200 testes confirmatórios, realizados em paralelo com a metodologia de "Sanger" / Preparo da Biblioteca / Sequenciamento / Análise de Dados.

Resultados

Os resultados obtidos validaram a técnica para análise genética por NGS, onde a avaliação de qualidade "Q" de todas as amostras sequenciadas ficaram acima de Q30 com erro de 0,1% e estimativa de 1 erro a cada 1.000 fragmentos sequenciados.

Discussão e Conclusões

O NGS mostrou-se promissor, com o aumento da cobertura do gene HLA e identificação de novos alelos que estão sendo avaliados pelo comitê internacional (international ImMunoGeneTics projecT - IMGT). As informações obtidas através da técnica de sequenciamento contribuiu para uma análise mais acurada, e eficiente, além de otimizar a técnica aplicada.

Palavras Chave

HLA. Imunogenética. Sanger. NGS-Illumina.