Dados do Trabalho

Título

Interferência do tratamento com pronase na quantificação de moléculas de superfície de linfócitos

Introdução

Prova cruzada (XM) por citometria de fluxo (CF) positiva com linfócitos T (LT) e negativa com linfócitos B (LB) tem sido atribuída a anticorpos (Ac) contra antígenos HLA-C cuja expressão seria maior em LT do que em LB. O objetivo deste estudo foi investigar se a pronase , utilizada no XM-CF para impedir reações falso-positivas no XM contra LB, altera a detecção, por Ac monoclonal anti-HLA-C monomórfico, de HLA-C na superfície celular e se influi em resultados de XM com soros contendo Ac HLA-C.

Material e Método

Linfócitos totais isolados de sangue periférico (kit Stemcell) de dois indivíduos foram tratados com pronase (0, 1, 2,35, 6,5 e 7,5 U/mL) e marcados com Ac monoclonais contra HLA-C-PE (BD Pharmingen), CD3-PE-Cy5 e CD19-FITC (ambos eBioscience). As mesmas células foram usadas em XM-CF (protocolo Halifaster) com dois soros com Ac anti-HLA-C reconhecendo os epítopos 76VRN e 80k. As duas células eram portadores de HLA-C contendo pelo menos um destes epítopos.

Resultados

Em LT, pronase, nas concentrações 1, 2,35, 6,5 e 7,5 U/mL, aumentou, em relação a células não tratadas, a detecção de HLA-C, em média, 259, 359, 295, 253 %, respectivamente, e de CD3, em média, 165, 249, 295 e 321 %, respectivamente. Em contraste, o efeito sobre HLA-C em LB foi mínimo ou inexistente e, a partir da concentração de 6,5 U/mL, causou diminuição de cerca de 40% na detecção de CD19. A pronase não causou alteração nos resultados de XM -T ou -B, nem maior valor de MCF em LT do que em LB.

Discussão e Conclusões

O uso de pronase aumenta a detecção, por anticorpo monoclonal, de antígenos HLA-C em LT, mas não em LB. Os experimentos realizados com XM, entretanto, não evidenciaram diferenças qualitativas nem quantitativas entre XM-T e XM-B quando as células foram tratadas com pronase.

Palavras Chave

FlowXM, pronase, HLA-C