Título

FRACIONAMENTO DE EXTRATO DE CAULE DE STRYPHNODENDRON ADSTRINGENS E APLICAÇAO NA INDUÇAO DE LIGAÇOES CRUZADAS EM CORNEA

Introdução

A indução de ligações cruzadas no estroma corneano mostra-se como uma alternativa eficiente no bloqueio da progressão do ceratocone. A aplicação de polifenóis neste processo de reticulação é uma alternativa que tem levado a resultados promissores. Neste trabalho foram avaliadas diferentes técnicas de extração de polifenóis, a partir de cascas de Stryphnodendron adstringens (barbatimão), além da eficiência da aplicação de uma fração enriquecida nestes compostos na indução de ligações cruzadas em córneas de abatedouro.

Métodos

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da UNIFESP (n.3084280818). Cascas de barbatimão foram submetidas a diferentes processos de extração: mistura de acetona/água (2:1); extrações consecutivas com hexano, acetato de etila, butanol e água, ambas em ultrassom e, extração com metanol ou água a quente, sob-refluxo. Olhos de porco de abatedouro foram submetidos à retirada do epitélio e trepanados. No grupo controle os olhos não receberam tratamento, enquanto nos grupos tratados os olhos foram expostos à solução de cada extrato vegetal 4% por 2 h. Todas as córneas foram avaliadas por calorimetria exploratória diferencial (DSC) para obtenção de valores de temperatura de desnaturação. Posteriormente, o extrato butanólico foi submetido a fracionamento em coluna com fase estacionária Sephadex LH20, onde foram obtidas 22 frações que foram analisadas para determinação de proantocianidinas e por HPLC. Córneas foram tratadas por 2 h com solução 4% da fração que apresentou o melhor perfil de purificação e a eficiência deste processo foi analisada por DSC.

Resultados

O extrato butanólico, que apresentou a maior concentração de proantocianidinas (9,8%) além de uma coloração mais clara, foi selecionado para realização de um fracionamento em coluna. Obteve-se uma fração com elevada pureza (fração 16) que apresentou concentração de proantocianidinas de 12,9%. A análise por DSC mostrou um aumento significativo na temperatura de desnaturação de córnea tratada com a fração 16 (Td=93,5 °C) em relação ao grupo controle (Td=70,2 °C).

Conclusões

O extrato butanólico da casca de barbatimão, por apresentar menos pigmentação e levar a um aumento significativo na temperatura de desnaturação de córneas, foi submetido a um processo de fracionamento, que levou a obtenção de uma fração com alta pureza enriquecida em polifenóis, a qual foi eficiente em promover modificação do perfil de desnaturação de córneas.

Palavras Chave

Barbatimão, Córnea, Extratos Vegetais, Fracionamento, Polifenóis

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